蛋白质和dna去磷酸化
去磷酸化指的是水解去除磷酸(po43−)基团的过程。在对蛋白质或dna去磷酸化时，需要使用酶或水解酶切割酯键。例如，磷酸酶可将磷酸单酯水解为磷酸根离子和带有游离羟基(oh)基团的分子，从而去除磷酸基团。 默克www.sigmaaldrich.cn提供各类生命科学解决方案和服务。
1.利用小牛肠碱性磷酸酶对dna进行去磷酸化
材料
牛小肠碱性磷酸酶（货号 p4978）
10x cip缓冲液（货号c3225）
1 m nacl
0.5 m tris-hcl，25 °c下ph 7.9
0.1 m mgcl2
0.01 m 二硫苏糖醇存储缓冲液
10 mm tris-hcl, ph 8.2
50 mm kcl
1 mm mgcl2
0.1 mm zncl2
50%甘油。
操作流程
1x cip缓冲液溶解dna(0.5 µg dna/10 µl)。
对于5’突出的粘末端dna加入0.1单位/皮摩尔的cip；对于3'突出的粘末端或布路姆试剂加入1单位/皮摩尔。
在37℃孵育60分钟。
苯酚/氯仿2（货号p3803 或p2069）提取或凝胶纯化dna。*乙醇沉淀法恢复dna。2
注意：苯酚提取或凝胶纯化后无需再热灭活。
热灭活：对于牛肠酶，在5毫摩尔/升的乙二胺四乙酸下，加热至75℃10分钟，可使95%以上的活性失活。 注意：大肠杆菌的碱性磷酸酶比牛肠酶在高温下更稳定，也更耐热灭活。
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