白介素试剂盒检测原理：
白介素6elisa试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。异性抗il-6单克隆抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品和检测样本，经过孵育，样本中存在的il-6与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入生物素化的单克隆抗体，孵育。洗涤去除未结合的生物素抗体，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素（s-hrp）。洗涤，加入显色底物tmb，避光显色。终止液终止反应，在450 nm波长（参考波长570-630 nm）测定吸光度值。颜色反应的深浅与样本中il-1α的浓度成正比。
注意事项：1. 试剂盒的试剂不能与其它批号的试剂或超出有效期的试剂混合使用。
2. 试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡30 分钟。
3. 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
4. 实验中未用的板条立即放回包装中，密闭封口，4℃保存。
5. 充分混匀对反应结果尤为重要，推荐使用低速频率振荡器或者每10分钟手动摇匀。
6. 对于样品和标准品，建议做双孔或者三孔检测（复孔）。
样品收集、处理与保存。
1、细胞培养上清液：1000xg离心10分钟去除颗粒和聚合物。
2、血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热源和内毒素的试管。收集血液后，1000xg离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
3、血浆：edta，柠檬酸盐和肝素血浆可用于检测。1000xg离心30分钟去除颗粒。
4、**首先室温放置1小时，然后取上清使用试剂盒中提供的样本稀释液处理样本。
5、保存：如果样本不直接使用，将其分为小部分（250~500 ul）－70℃下保存，避免反复冷冻。尽可能不要使用溶血或高脂血。如果血清中有大量颗粒，检测前先离心或过滤。
注意：不要在37℃或更高温度加热解冻。在室温下解冻并确保样本均匀地充分解冻。
三。检测步骤：
1. 准备好所有需要的试剂及工作浓度标准品。
2. 将不需要的板条拆卸下来，放回装有干燥剂的铝箔袋，重新封好封口。
3. 300 μl洗液洗板两次，加入300 μl洗液静置浸泡15分钟。为了获得理想的实验结果浸泡是必须的。弃掉洗液之后，在吸水纸上将微孔板拍干。洗板完成之后，请立即使用微孔板，不要让微孔板干燥。
4. 每孔加入50 μl检测缓冲液。
5. 加入50 μl的标准品，样本和对照品。保证连续加样，请不要间断。加样过程在15分钟内完成。
6. 每孔加入50 μl检测抗体。
7. 使用封板膜封板。100转/分钟振荡，室温孵育2小时。
8. 弃掉液体，每孔加入300 μl洗液洗板，洗涤6次。每次洗板，在吸水纸上拍干。为获得理想的实验性能，必须*移除残留液体。
9. 每孔加入100 μl辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。
10. 使用新的封板膜封板。100转/分钟振荡，室温孵育45分钟。
11. 重复步骤8。
12. 每孔加入100 μl显色底物tmb，避光，室温孵育10-30分钟。
13. 每孔加入100 μl终止液。颜色由蓝色变为黄色。如果颜色呈现绿色或者颜色的变化明显不均匀，请轻轻叩击板框，充分混匀。
14. 白介素6elisa试剂盒使用的检测仪器，在30分钟之内，酶标仪450 nm波长测定od值。如果能够进行双波长检测，参考波长设定为570 nm或者630 nm。如果不能双波长检测，请用450 nm的测定值减去570 nm或630 nm的测定值。仅使用450 nm测定会导致od值偏高，并且准确度降低。
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