#玩转ai摘要#
流式细胞术（fcm）常用于测定细胞表面/胞内/核内抗原对细胞进行免疫表型分析，在胞内/核内抗原检测时，可能会碰到“有与没有都一样”的尴尬情况，明明胞内有这个抗原但硬是检测不到。此时，当排除了实验误操作、抗体非特异性、标记淬灭等情况，不妨回头看看是否破膜问题吧。
正常情况下，荧光标记的抗体无法通过完整的细胞膜进入细胞内，用流式细胞仪测定细胞内抗原，需先利用破膜剂破坏细胞膜的完整性，产生可供抗体通过的小孔。破膜效果的好坏将直接影响荧光染色和结果分析。
尽量保持细胞形态，使可根据散射光信号分析细胞种类，如区分淋巴细胞、单核细胞和粒细胞；
不影响细胞膜表面抗原与抗体的特异性结合（若需同时检测细胞内外抗原）。
常见破膜剂。
皂素。有机溶剂：乙醇、甲醇、丙酮等。
triton-x、tween-20
优劣势对比。
细胞形态影响：利用皂素破膜，外周血细胞的流式散射光图中淋巴细胞、单核细胞和粒细胞分群清晰；而另两种破膜剂，通过与细胞膜上的蛋白质和脂质作用发挥破膜效果，易导致细胞发生皱缩，这3群细胞很难分开；
对抗原影响：
标记表面抗原和破膜两步操作的先后顺序有所影响：以检测表面cd8为例，先标记再破膜对cd8无明显影响，而先破膜再标记，乙醇和triton-x会使表达cd8细胞比例和每个细胞上抗原表达量急剧下降；
对不同抗原的影响不同：如检测ifn-γ时，triton-x破膜会导致其检测率降低，而皂素和乙醇无影响；检测tnf-α时，皂素的敏感性要高于其他两种。
其他：皂素的破膜效果是可逆的，一旦被洗掉容易导致破膜失效，因此在后续实验过程中需用含有皂素的洗涤液洗涤；有机溶剂可实现固定和破膜；triton-x和tween-20相似，可破坏所有脂质层，可破核膜。总体来说，皂素是相对理想的细胞破膜剂，但无法破核膜，若需破核膜还是要用triton-x和tween-20。
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