如何提高细胞培养的成功率？

细胞培养是指将从体内组织采集的细胞放置在模拟体内生存环境的体外环境 (无菌、适温、营养丰富)中，使其生长、繁殖，并维持其结构和功能的一种技术。细胞培养的基本条件有哪些具体要求呢？我们应注意哪些事项，才能提高细胞培养的成功率呢？一起来看看吧！

①必须保证无菌条件

细胞感染微生物后，会因营养物质被夺而导致生长缓慢或停滞，甚至死亡。

②确保温度、ph适宜

一般哺乳动物细胞培养的温度控制在37℃，温度过高或过低均不利于细胞生长甚至会导致细胞死亡。动物细胞最适宜ph一般控制在7.2～7.4，在此范围细胞生长活跃，增殖速度快，如果过低或过高，细胞会因为细胞膜受损而死亡。

③理想的培养液

理想的细胞培养液可以同时解决细胞离体培养所需要的ph、渗透压、营养物质、调节物质的全部需要。细胞培养液中需含有细胞增殖、生长所需要的各种营养物质。如提供能量的物质（n源、c源）、代谢调节控制的物质（无机盐、维生素、激素）。

④血清的选择

血清中含有多种促进细胞生长的因子，**的血清应该是无溶血、橘黄色清亮透明、无细菌、无支原体污染的粘稠状液体。一般保存于-20℃以下，时间不易过长。培养基中的血清浓度在15％-20％时细胞生长比较好，当超过30％时反而不利于细胞生长，因而保证小牛血清的质量是细胞培养的关键。

⑤提供一定量的气体

在细胞培养过程中需要提供一定量的气体（o2和co2）。co2具有调节ph和缓冲的作用，一般提供5％co2。

⑥合适的培养空间

培养液与液面上空间的体积比例一般以1：10为宜，培养液液面高度最好维持在2-5mm的范围，以便于气体交换。

⑦细胞的冻存与复苏

遵循慢冻快融的原则。dmso是应用较广泛的体外培养细胞冻存保护剂，其常用浓度为10％-20％，不同种属细胞的最适浓度也存在一定差别，例如10％二甲基亚砜浓度对长期冻存k562细胞较为适宜。

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